近年來(lái)，免疫治療經(jīng)歷了一系列突飛猛進(jìn)的發(fā)展，以特異性過(guò)繼免疫細(xì)胞療法及免疫檢查點(diǎn)抗體療法為代表的新型免疫治療技術(shù)因其在臨床研究中取得的顯著療效而成為學(xué)術(shù)界和產(chǎn)業(yè)界共同關(guān)注的焦點(diǎn)。其中，嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T療法）因其在白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等病種的治療中展現(xiàn)出顯著的治療效果而成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。隨著我國(guó)對(duì)CAR-T技術(shù)的研究不斷深入，國(guó)內(nèi)企業(yè)的積極布局和產(chǎn)業(yè)鏈的延伸，我國(guó)的CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)也在緊隨趨勢(shì)的發(fā)展。

原材和輔料及其質(zhì)量控制

1、在CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的原材料和輔料通常都要考慮哪些因素？

       生產(chǎn)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的原材料是指生產(chǎn)過(guò)程中所用的所有生物原材料和化學(xué)原材料，它們不是CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的目標(biāo)組成成份，如培養(yǎng)基、PBMC分離試劑、T細(xì)胞分選試劑、激活劑、細(xì)胞因子(如IL-2、IL-7及IL-15)、血清或血清替代物等。而CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的輔料是指其產(chǎn)品配方中所使用的輔助材料，是其細(xì)胞產(chǎn)品中的成份，如人血白蛋白、人血小板提取物、凍存液(如DMSO)等。

       一個(gè)完整CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的制備過(guò)程包括基因載體物質(zhì)的制備及CAR-T細(xì)胞終產(chǎn)品的制備兩個(gè)大的生產(chǎn)環(huán)節(jié)，同時(shí)，載體物質(zhì)的制備又包括質(zhì)粒載體制備和/或病毒載體制備工藝過(guò)程，因此，在考慮選擇原材料時(shí)，不僅要考慮CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品制備過(guò)程中所用的原材料，也要考慮基因載體物質(zhì)制備過(guò)程中所用的原材料(不包括生產(chǎn)的起始原材料，如細(xì)胞基質(zhì)和菌毒種)，如細(xì)菌及細(xì)菌培養(yǎng)基、牛血清、添加因子、轉(zhuǎn)染試劑(如鈣轉(zhuǎn)試劑、PEI、Lipo2000等)以及核酸酶等等。如果在CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中還使用了自制的試劑和材料，還要考慮制備這些自制試劑中的原材料。

       在早期的基礎(chǔ)研究時(shí)，研究者對(duì)原材料及輔料的關(guān)注可能不足，但由于原材料和輔料對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量及安全性均有重要影響，因此，一旦準(zhǔn)備進(jìn)入產(chǎn)品開發(fā)階段，研發(fā)人員就要盡早開展原材料及輔料的評(píng)估及篩選，而且在臨床過(guò)程中要進(jìn)一步開展相關(guān)的研究，在確證性臨床前應(yīng)完成充分的質(zhì)量評(píng)估工作。

2、轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染T細(xì)胞的病毒載體/質(zhì)粒載體是否可按照原材料管理？

       CAR-T細(xì)胞是基因治療的ex vivo方式，通過(guò)病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)或質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染，將CAR基因轉(zhuǎn)入T細(xì)胞中從而獲得CAR-T細(xì)胞，雖然它們未轉(zhuǎn)染的部分在后續(xù)的T細(xì)胞擴(kuò)增及洗滌過(guò)程中經(jīng)驗(yàn)證可被去除，但其所攜帶的遺傳物質(zhì)則是CAR-T細(xì)胞的重要組成部分且是使T細(xì)胞具有腫瘤殺傷活性的重要基礎(chǔ)，這一點(diǎn)與生產(chǎn)中所用的原材料的特性*不同，其質(zhì)量對(duì)CAR-T細(xì)胞具有重要影響，因此，轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染T細(xì)胞的病毒載體/或質(zhì)粒載體按照產(chǎn)品的理念進(jìn)行管理更為合理。

      但同時(shí)也還需要考慮到，也正是因其不直接進(jìn)入患者體內(nèi)，在后續(xù)的細(xì)胞擴(kuò)增及CAR-T制劑工藝中會(huì)有稀釋或洗滌步驟，因此，通過(guò)驗(yàn)證可證明后續(xù)工藝可以降低其殘留的風(fēng)險(xiǎn)，則可以結(jié)合工藝驗(yàn)證的結(jié)果制定更為合理的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

3、如何進(jìn)行原材料和輔料的選擇和風(fēng)險(xiǎn)控制？

       在CAR-T細(xì)胞制備過(guò)程中使用的原材料有藥用級(jí)別的(如IL-2)，也有非藥用級(jí)別的(如IL-7)；有的原材料在國(guó)外被批準(zhǔn)用于藥品生產(chǎn)，但尚未在國(guó)內(nèi)獲得注冊(cè)，如某種CD3/CD28磁珠；有的同一種試劑分別存在藥用級(jí)別和非藥用級(jí)別，非藥用級(jí)又分為GMP級(jí)別及研究用級(jí)別；有的試劑是生物源性材料，如病毒制備中會(huì)用到的牛血清和胰酶；有的試劑甚至要自行制備等，面對(duì)如此復(fù)雜的情況，CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品的研究者就需要考慮采用何種方法選擇以及控制原材料。

原材料的選擇是基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原則，通常會(huì)有以下幾種考慮：

     (1) 在產(chǎn)品研發(fā)早期就開始設(shè)計(jì)所用原材料的類別并分析其可能的風(fēng)險(xiǎn)，可根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》三部中“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程”及國(guó)外相關(guān)技術(shù)要求對(duì)原材料的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)進(jìn)行評(píng)估并分類，同一種試劑或材料，優(yōu)先選擇低風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別的，如藥用無(wú)菌制劑優(yōu)于藥用制劑，藥用級(jí)優(yōu)于非藥用級(jí)、GMP級(jí)優(yōu)于非GMP級(jí)、非動(dòng)物源性優(yōu)于動(dòng)物源性材料等；

     (2) 根據(jù)對(duì)每一種原材料風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果建立相關(guān)的質(zhì)量檢測(cè)項(xiàng)目、檢測(cè)方法及放行標(biāo)準(zhǔn)，并在產(chǎn)品研發(fā)過(guò)程中不斷分析關(guān)鍵原材料質(zhì)量對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響，并不斷改進(jìn)關(guān)鍵原材料的質(zhì)量要求。

     (3) 對(duì)于研究級(jí)別的生物源性的原材料，不僅要設(shè)置它們的安全性質(zhì)控項(xiàng)目，如無(wú)菌、內(nèi)毒素、支原體、分枝桿菌及外源病毒污染的檢測(cè)等，還要考慮它們的純度、效價(jià)或?qū)?xì)胞活化、增殖的生物學(xué)效力的質(zhì)控項(xiàng)目。動(dòng)物源性材料的質(zhì)量控制，如牛血清，需至少按照已有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或要求進(jìn)行原材料質(zhì)控及放行；

     (4) 對(duì)于自行研制的原材料，如某種特殊要求的細(xì)胞因子，不僅需要建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，還需要有制備工藝及其工藝驗(yàn)證等數(shù)據(jù)支持，有的高風(fēng)險(xiǎn)的原材料甚至可能還會(huì)要求開展動(dòng)物體內(nèi)的安全性評(píng)估。此類原材料的檢測(cè)要求需要根據(jù)其使用方式、下游工藝的清除驗(yàn)證數(shù)據(jù)以及潛在風(fēng)險(xiǎn)來(lái)確定。

      輔料的選擇及控制要求同樣是基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原則，因輔料是與CAR-T產(chǎn)品一同進(jìn)入患者體內(nèi)，因此，選擇低風(fēng)險(xiǎn)的輔料以及嚴(yán)格控制輔料風(fēng)險(xiǎn)是基本原則，如一種輔料同時(shí)存在幾種風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)來(lái)源時(shí)，應(yīng)選用風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)低的輔料；對(duì)于高風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)的輔料，應(yīng)在產(chǎn)品研發(fā)的早期評(píng)估使用這些輔料的必要性，并尋找其他替代物或替代來(lái)源。

4、在載體物質(zhì)或CAR-T細(xì)胞終產(chǎn)品中是否需要進(jìn)行原材料殘留的質(zhì)量檢測(cè)？

       在載體物質(zhì)或CAR-T細(xì)胞終產(chǎn)品中是否進(jìn)行原材料的殘留控制，主要考慮兩個(gè)方面，一個(gè)是根據(jù)原材料的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別，評(píng)估載體純化工藝或CAR-T細(xì)胞制備工藝對(duì)其去除能力，二是對(duì)于風(fēng)險(xiǎn)高的原材料除了評(píng)估去除能力外，還需要在載體或CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品制備的適工藝階段或終產(chǎn)品終進(jìn)行殘留量檢測(cè)的控制并建立控制標(biāo)準(zhǔn)，如慢病毒工藝中使用的降解DNA的核酸酶Benzonase的殘留控制，牛血清白蛋白殘留量的檢測(cè)等。

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