1.什么是化學(xué)成分明確的無血清培養(yǎng)基？

答：化學(xué)成分明確的培養(yǎng)基只含有分子量和濃度已知的組分。

2.使用無血清培養(yǎng)基或組分有什么優(yōu)點？

答：批間一致；化學(xué)成分明確；與含血清培養(yǎng)基相比，蛋白產(chǎn)量高、細胞死亡率低、細胞活性高；培養(yǎng)基性能穩(wěn)定，后續(xù)分離純化容易，因此無需預(yù)先篩選血清批次，簡化了生產(chǎn)規(guī)程。

3.我能用DMEM替代DMEM/F12么？

答：DMEM/F12培養(yǎng)基是DMEM培養(yǎng)基和F12培養(yǎng)基的1:1混合物，因此DMEM/F12的營養(yǎng)好于DMEM。

4.如何提高有血清培養(yǎng)的細胞向無血清培養(yǎng)條件轉(zhuǎn)化的成活率？

答：一般而言，將細胞從血清培養(yǎng)條件過渡到無血清培養(yǎng)需要一個過渡，可以先嘗試梯度減少原培養(yǎng)基，加入無血清培養(yǎng)基，直到zui后*替換為無血清培養(yǎng)基即可。不要突然全部換掉原培養(yǎng)基，細胞可能會由于環(huán)境的突然改變不適應(yīng)而減緩增殖或出現(xiàn)大量分化。

5.如何判斷細胞合適的傳代時間？

答：一般來說，在電鏡下觀察細胞長滿孔板（或者培養(yǎng)板/瓶）的85-90%為*傳代時間點。但具體的傳代時間也因具體實驗的要求、所需細胞的數(shù)量而有所調(diào)整。但如果細胞長不滿50%就傳代的話，也會影響細胞自身的增殖和生長（細胞與細胞之間也存在著“扎堆抱團”效應(yīng)）。

6.培養(yǎng)MSCs是否需要提前鋪板？

答：針對不同的培養(yǎng)基要求不同，有一些培養(yǎng)板需要提前鋪板包被才可以使用有的不需要對使用的培養(yǎng)板進行鋪板包被處理，MSCs可以直接進行培養(yǎng)或傳代等，大大節(jié)省了鋪板膠的成本和人力成本。

7.日常培養(yǎng)MSCs的過程中，是否需要每天換液？

答：細胞培養(yǎng)換液時間應(yīng)該根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求一同確定。一般2-3d應(yīng)該換一次生長液。傳代操作的第二天換液，及時給新傳代的細胞補充營養(yǎng)成分，更有利于細胞的生長。

8.如何判斷培養(yǎng)的細胞是否污染？

答：細胞污染的話，從表象來看，培養(yǎng)基會發(fā)黃渾濁，如果還可以用肉眼看到一層細沙狀的污染物沉積在培養(yǎng)液底部，則是典型的細菌污染，在電鏡下還可以看到黑點狀的細菌在不斷晃動；如果肉眼看見的是白色的絲狀或者類似絮狀的物質(zhì)，在電鏡下也可觀察到類似現(xiàn)象，則可判定為真菌污染。但具體是哪一類的細菌或者真菌污染，還需要更進一步的分析研究。

9.細胞培養(yǎng)基里添加抗生素是不是必須的？

答：抗生素的作用主要是防止細胞培養(yǎng)液中添加成分或者細胞培養(yǎng)操作過程中帶來的外界污染，加入抗生素可以有效降低細胞污染的幾率，但視培養(yǎng)條件和培養(yǎng)環(huán)境的差異而定，抗生素也不是必須添加的。

10.細胞復(fù)蘇的原則：快速融化。必須將凍存在-80°C液氮中的細胞快速融化至37°C，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。

11.細胞倍增數(shù)（PD）和“傳代”之間的區(qū)別是什么？

答：細胞倍增數(shù)（PD）是在體外培養(yǎng)過程中細胞總數(shù)的2倍增加。在某個特定的時間點進行細胞倍增數(shù)的計算能夠給出一個準確的細胞年齡。相比之下，傳代僅僅是指子代培養(yǎng)過程，即從培養(yǎng)容器分離細胞（使用胰蛋白酶/EDTA或accutase），然后以較低的密度接種，以便作進一步的細胞生長。傳代通常不考慮可應(yīng)用的不同的分裂比率。不同的分裂比率產(chǎn)生一個*的傳代數(shù)量，但細胞倍增數(shù)是變化的。因此，傳代只是對實際培養(yǎng)年齡的一個粗略估計。

12.培養(yǎng)正常人體細胞可以添加抗生素么？

答：為了使細胞實現(xiàn)*的生長，我們建議不要使用抗生素。在添加抗生素的情況下，大多數(shù)原代的或者正常的人體細胞的生長活性都會降低。在某些情況下，當不能保證100%的無菌環(huán)境時，為了防止?jié)撛诘奈⑸锔腥?，建議在培養(yǎng)基中添加抗生素。

13.凍存的細胞和增殖中的細胞之間的區(qū)別是什么？

答：一般運送細胞需要用干冰進行保存，運輸?shù)诌_后，必須轉(zhuǎn)移到液氮中保存，或者解凍后直接接種到合適的培養(yǎng)基中，并使用合適的組織培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

14.添加補充劑之后培養(yǎng)基可以使用多久？

答：一旦已經(jīng)向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入補充劑，則在4°C的保質(zhì)期為6-8周。盡量避免將培養(yǎng)基重復(fù)加熱至37°C，這將降低生長因子的活性和L-谷氨酰胺的濃度。